利来国际大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代。传代间隔2天换液。

备注：悬浮细胞可通过离心收集，贴壁细胞需按贴壁方法处理。用无菌离心管收集的培养基可用于过渡培养。

二、细胞收到后的处理

在细胞恢复良好状态后，将其灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输安全。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃，5% CO2的培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态后方可进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照留存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片视为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液并保留5ml完全培养基，放入37℃，5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。

2. 对于贴壁细胞的传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状况，若细胞变圆并脱落，迅速加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按照1:2比例分瓶传代（即两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃，5% CO2的细胞培养箱中培养。

3. 对于悬浮细胞的传代步骤：

1. 方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃上清液，加入1-2ml培养液后吹匀，分瓶至新的含有8ml完全培养基的瓶中。
2. 方法二：可选择半数换液，弃去一半培养基后，将剩余细胞悬起，按1:2比例分瓶至新的含8ml完全培养基的瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩情况后，加入5ml完全培养液终止消化，将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的利来国际无血清冻存液（货号：C7001），混匀后填入冻存管中。

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。若后续需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，直到没有结晶，然后用75%酒精清洁冻存管外壁。

2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。

3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，接种于T25培养瓶，置于37℃，5% CO2细胞培养箱中。翌日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因粘附不牢而脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，用胰酶处理沉淀，再进行细胞重悬和传代。

五、售后条款

1. 有关细胞出现问题时的重发情况：

1. 运输过程中的问题（细胞丢失、瓶身破损等）可申请重发。
2. 细胞污染需在收到产品48小时内提交真实实验结果，经核实可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏后存活率低，需提供照片重发。
4. 细胞在复苏后或静置未开封出现污染可申请重发。
5. 活性问题需在7天内提交实验结果，凭台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 收到产品当天及第2、3天拍照，超时未告知视为合格。

2. 不予重发的情况包括：

1. 客户原因导致的细胞污染。
2. 客户不当操作导致细胞状态不良。
3. 非推荐培养体系导致的细胞状态问题。
4. 未提供细胞培养前3天照片的情况。
5. 其他处理后的细胞状况不佳。
6. 收到后2天内未反馈的情况。
7. 视具体情况而定。

以上为利来国际大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养的详细说明，请仔细遵循相关指导原则以确保实验的成功进行。